色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。

　　柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到最佳效率，除柱外死體積要小外，還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使好的裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中，柱外效應(yīng)對(duì)柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。

　　色譜柱的使用有哪些小妙招

　　•加裝保護(hù)柱

　　保護(hù)柱屬消耗品，經(jīng)過(guò)一定次數(shù)的樣品分析(50~100次)后，出現(xiàn)柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時(shí)，應(yīng)考慮更換保護(hù)柱。

　　•過(guò)濾流動(dòng)相和樣品

　　流動(dòng)相通常由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成，原則上，所有經(jīng)過(guò)色譜柱的流動(dòng)相均應(yīng)過(guò)濾，但在實(shí)際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別 。

　　•凈化樣品

　　樣品中含有對(duì)色譜柱有損害的化學(xué)成分，如產(chǎn)生吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機(jī)分子和強(qiáng)吸附性物質(zhì),以及可能對(duì)柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團(tuán)離子。在進(jìn)樣前應(yīng)盡可能對(duì)樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。

　　•避免過(guò)高的柱壓

　　(1)柱壓過(guò)高時(shí)，盡可能采用較小的流速，以不超過(guò)柱最大允許壓力的一半為宜。

　　(2)當(dāng)流速較大時(shí)，應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位。

　　(3)使用手動(dòng)進(jìn)樣閥時(shí)，進(jìn)樣閥的切換要盡可能的快。

　　•注意溫度和酸堿度

　　一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱最高使用溫度不超過(guò)60℃，以低于40℃為宜，特別是在流動(dòng)相pH接近使用限度時(shí)，更應(yīng)降低使用溫度。目前的鍵合硅膠色譜柱標(biāo)示的pH適用范圍可達(dá)2~10，但在實(shí)際使用時(shí)應(yīng)避免特殊的pH條件，特別是在偏堿性的條件(pH≥8)下使用。如必須要在特殊的pH條件下使用時(shí)，可通過(guò)以下方法避免柱損害：

　　(1)在泵和進(jìn)樣閥之間加裝預(yù)柱(飽和柱)來(lái)飽和流動(dòng)相；

　　(2)降低使用溫度；

　　(3)檢驗(yàn)完畢后立即用與所使用的流動(dòng)相互相混溶的“溫和溶劑”*清洗。

　　•正確及時(shí)的沖洗

　　始試驗(yàn)前，了解柱中當(dāng)前是何種溶劑。對(duì)于新色譜柱，如無(wú)特殊說(shuō)明均為評(píng)價(jià)報(bào)告中所用流動(dòng)相。柱中當(dāng)前溶劑一定要與分析樣品所用流動(dòng)相互溶，如不能混溶，要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過(guò)渡。異丙醇是能與各種溶劑混溶的試劑，可作為中介流動(dòng)相使用。對(duì)于含有緩沖鹽的流動(dòng)相，好的辦法是先用與分析用流動(dòng)相組成*相同但不含緩沖鹽的溶液進(jìn)行沖洗，再逐步過(guò)渡到純甲醇沖洗。